Laboratoire National de Référence Belge des Echinococcoses (LNRBE)

Pour assurer la mission d’expertise biologique, les activités suivantes sont réalisées :

1. Diagnostic de l’échinococcose alvéolaire et kystique par des techniques sérologiques et moléculaires
2. Confirmation du diagnostic établi par un autre laboratoire de biologie clinique
3. Confirmation d’un diagnostic histologique suggéré par un laboratoire d’anatomopathologie
4. Suivi thérapeutique pour l’échinococcose alvéolaire
5. Typage moléculaire par l’analyse des microsatellites EmsB

Le LNR assure une activité de conseil auprès des professionnels de la santé qui sont confrontés à des patients atteints d’une échinococcose ou présentant des signes cliniques évocateurs. Pour toute question, le personnel du LNR est disponible par e-mail ou téléphone

Le recensement des cas d’échinococcose sur le territoire belge a été initié dès les années
1990 par le Professeur Yves Carlier (ULB), puis le Professeur Carine Truyens, assurant la direction du laboratoire de référence pour l’échinococcose alvéolaire. Depuis 2021, le laboratoire de microbiologie du CHU de Liège assure le rôle de laboratoire de référence suite à une réorganisation des laboratoires de l’ULB. Nous poursuivons l’activité de recensement des cas, par le biais de l’envoi du formulaire ECDC (« European Centre for Disease Prevention and Control ») qui est adressé à tous les laboratoires belges de biologie clinique en début d’année. Les laboratoires sont également invités à se renseigner auprès des infectiologues de leur institution si des cas d’échinococcoses non diagnostiqués par sérologie et/ou PCR ont été détectés durant l’année.

Bien que la participation soit sur base volontaire, cette démarche permet de suivre l’évolution des échinococcoses en Belgique (notifiée depuis 2010), d’en déterminer la distribution géographique et de cibler les populations à risque. Les données d’une surveillance épidémiologique permettent ainsi d’orienter les mesures préventives à mettre en œuvre pour freiner l’émergence de nouveaux cas et d’alerter les autorités sanitaires et les citoyens belges sur une éventuelle augmentation de l’incidence. Les données recueillies sont envoyées à l’ECDC pour compléter les données européennes. 

Le LNR assure l’activité de développement et mise au point de nouvelles méthodes de diagnostic. Il réalise également le typage moléculaire par l’analyse des microsatellites EmsB pour les souches d’Echinococcus multilocularis circulantes chez l’homme, le renard et les rongeurs.

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L’échinococcose une maladie négligée, voire totalement méconnue des spécialistes de la santé. De plus, l’augmentation des cas belges d’échinococcose alvéolaire, suggérant une contamination autochtone, implique la nécessité d’informer les médecins et la population sur l’endémie en cours. Il est donc indispensable de mettre en place des mesures préventives et sensibiliser les cliniciens  afin d’améliorer la prise en charge de la maladie. En ce sens, le LNR assure cette mission de transmission des informations par le biais de communications orales et écrites. 

 Une forte activité de collaboration est entretenue avec les cliniciens du CHU de Liège (groupe ECHINO-Liège) et les autres Centres de Référence tel que le CNR échinococcoses du CHU de Besançon (France). Ces entretiens multidisciplinaires permettent ainsi de gérer de façon optimale les cas d’échinococcose les plus difficiles. Les scientifiques du LNR font partie du groupe ECHINO-LIEGE, un groupe multidisciplinaire ayant pour but principal l’amélioration de la prise charge clinique des échinococcoses, plus particulièrement de la forme alvéolaire. Ce groupe se réunit régulièrement (3 fois/an) pour la présentation des nouveaux cas cliniques, discussion des cas en cours de traitement et des améliorations futures à apporter. Des contacts téléphoniques réguliers sont également de mise pour discussion des cas et transmission des résultats.

Des collaborations avec le département de la faune sauvage de la faculté de médecine vétérinaire de l’Université de Liège (Pr. Annick Linden) et l’Agence nationale de sécurité sanitaire de l’alimentation, de l‘environnement et du travail (ANSES, France) sont également entretenues de façon à étudier le lien relationnel entre l’homme et les animaux hôtes de l’échinococcus multilocularis. Pour cela, des DNA issus d’animaux circulant en Wallonie et France sont transmis au LNR. Cette coopération permet ainsi la mise en place d’études transversales impliquant les cliniciens et vétérinaires pour étudier par exemple les profils génétiques de l’E. multilocularis circulant chez les patients atteints d’échinococcose alvéolaire, l’hôte définitif (renards) et les hôtes intermédiaires (rongeurs).

Pour le dépistage d'une échinococcose de forme clinique non précisée, une combinaison de deux tests ELISA est réalisée : IgG anti-E. multilocularis Em2-rEm18 (détection quantitative des IgG dirigés contre les antigènes recombinants spécifiques Em2 et rEm18) et IgG anti-E. granulosus (détection quantitative des IgG dirigés contre les antigènes bruts de fluides hydatiques), utilisée en l'absence de données cliniques et épidémiologiques évocatrices d'une forme précise. En cas de positivité de l'un des deux ELISA, ou en cas de suspicion clinique, un immunoblot (western blot) est ajouté au panel, pour diagnostic ou confirmation respectivement : ce test qualitatif, reposant sur une membrane de nitrocellulose portant différents antigènes, détecte les IgG dirigés contre des antigènes spécifiques à E. granulosus, à E. multilocularis et communs au genre Echinococcus sp., et s'interprète selon le poids moléculaire des bandes apparues. Sa grande spécificité et sensibilité permettent de différencier immunologiquement une échinococcose kystique d'une échinococcose multiloculaire. Un ELISA négatif n'excluant pas une réelle infection — dans certains cas, seul le western blot est positif —, ce dernier est également réalisé en cas de forte suspicion clinique malgré la négativité du test ELISA.

L'échantillon est un sérum, d'un volume minimum de 3 à 5 mL, conservé et transporté à une température comprise entre 2 et 8°C, selon les règles d'étiquetage et de conditionnement applicables aux échantillons infectieux.

Les tests sont réalisés une fois par semaine ; les résultats sont disponibles le jour même, ou une semaine plus tard si un contrôle s'avère nécessaire. Ils sont communiqués par compte-rendu papier ou électronique, les résultats positifs étant en outre transmis par téléphone et faxés au clinicien ou au laboratoire sous-traitant.

Le diagnostic sérologique de l'échinococcose alvéolaire repose sur la combinaison d'un test ELISA IgG anti-E. multilocularis Em2-rEm18, sensible, suivi d'une confirmation de spécificité par immunoblot, hautement spécifique. L'ELISA détecte quantitativement dans le sérum les IgG dirigés contre les antigènes recombinants spécifiques d'E. multilocularis (Em2 et rEm18) et est réalisé lors de toute suspicion d'échinococcose alvéolaire ; en raison de la faible sensibilité ou réactivité immunitaire dans l'échinococcose, quelle que soit sa forme, le LNR applique un seuil de détection abaissé pour augmenter la sensibilité — ce qui n'est envisageable qu'en combinaison avec l'immunoblot. Le seuil de détection (zone grise) se situe entre 0,6 et 1,1 : un index < 0,6 est négatif, un index ≥ 1,1 est positif. L'immunoblot détecte qualitativement les IgG dirigés contre des antigènes spécifiques à E. granulosus, à E. multilocularis et communs au genre Echinococcus sp., à l'aide d'une membrane de nitrocellulose portant différents antigènes, interprétée selon le poids moléculaire des bandes apparues ; sa grande spécificité permet de différencier immunologiquement une échinococcose kystique d'une échinococcose multiloculaire. Très sensible, il est parfois le seul test positif dans une échinococcose (kystique, dans l'expérience du laboratoire) : il est donc recommandé de le prescrire même en dépistage lorsque la suspicion radiologique est élevée.

L'échantillon est un sérum, d'un volume minimum de 3 à 5 mL, conservé et transporté à une température comprise entre 2 et 8°C, selon les règles d'étiquetage et de conditionnement applicables aux échantillons infectieux.

Les tests sont réalisés une fois par semaine ; les résultats sont disponibles le jour même, ou une semaine plus tard en cas de contrôle nécessaire. Ils sont communiqués par compte-rendu papier ou électronique, les résultats positifs étant en outre transmis par téléphone et faxés au clinicien.

Le diagnostic sérologique de l'échinococcose kystique repose sur la combinaison d'un test ELISA IgG anti-E. granulosus, sensible, suivi d'une confirmation de spécificité par western blot, hautement spécifique. L'ELISA détecte quantitativement dans le sérum les IgG dirigés contre des antigènes bruts ou recombinants de fluide hydatique d'E. granulosus, et est réalisé lors de toute suspicion d'échinococcose kystique ; son seuil de détection (zone grise) se situe entre 0,9 et 1,1 : un index < 0,9 est négatif, un index ≥ 1,1 est positif. Le western blot détecte qualitativement les IgG dirigés contre des antigènes spécifiques à E. granulosus, à E. multilocularis et communs au genre Echinococcus sp., à l'aide d'une membrane de nitrocellulose portant différents antigènes, interprétée selon le poids moléculaire des bandes apparues après électro-transfert du sérum ; il est réalisé en cas de positivité de l'ELISA, pour en confirmer la spécificité. Lorsque l'ELISA est négatif malgré des données cliniques et épidémiologiques équivoques, le western blot est tout de même réalisé comme méthode de dépistage pour confirmer ou infirmer ce résultat négatif : l'expérience du laboratoire a en effet démontré son utilité pour détecter les faux négatifs obtenus par les méthodes immunoenzymatiques, en plus de sa grande spécificité.

L'échantillon est un sérum, d'un volume minimum de 3 à 5 mL, conservé au réfrigérateur entre 2 et 8°C et transporté dès que possible à cette même température, selon les règles d'étiquetage et de conditionnement applicables aux échantillons infectieux.

Les tests sont réalisés une fois par semaine ; les résultats sont disponibles le jour même, ou une semaine plus tard en cas de contrôle nécessaire. Ils sont communiqués par compte-rendu papier ou électronique, les résultats positifs étant en outre transmis par téléphone et faxés au clinicien ou au laboratoire sous-traitant.

Le suivi de l'échinococcose alvéolaire repose sur l'association de deux tests ELISA détectant dans le sérum, respectivement, les IgG dirigés contre les antigènes recombinants Em2 et rEm18, et contre le seul antigène rEm18, spécifiques d'E. multilocularis ; un western blot est également employé pour le suivi de l'activité parasitaire chez les patients sous traitement médicamenteux depuis 24 mois. La combinaison des deux ELISA permet de suivre la décroissance du titre d'anticorps, témoin de l'activité parasitaire, chez les patients atteints d'échinococcose alvéolaire sous benzimidazolés — que ce soit pour évaluer l'efficacité du traitement et détecter une éventuelle reviviscence de l'infection, ou pour suivre un patient dont les lésions sont a priori calcifiées et sans activité métabolique parasitaire ; une évolution favorable est validée par un index inférieur à 0,6, toute élévation devant faire l'objet d'une nouvelle évaluation par imagerie. Ce suivi ELISA est réalisé tous les 3 mois la première année de traitement, puis à 6 et 12 mois la seconde année, en l'absence de guidelines publiées sur le suivi de l'échinococcose alvéolaire hormis une recommandation de test à deux ans post-traitement après chirurgie (Wen H. et al., 2019). Le western blot détecte quant à lui qualitativement les IgG dirigés contre des antigènes spécifiques à E. granulosus, à E. multilocularis et communs au genre Echinococcus sp., à l'aide d'une membrane de nitrocellulose portant différents antigènes, interprétée selon le poids moléculaire des bandes apparues ; il est réalisé 2 ans après le début du traitement.

L'échantillon est un sérum, d'un volume minimum de 3 à 5 mL, conservé entre 2 et 8°C et transporté dès que possible à cette même température, selon les règles d'étiquetage et de conditionnement applicables aux échantillons infectieux.

Les tests sont réalisés une fois par semaine ; les résultats sont disponibles le jour même, ou une semaine plus tard en cas de contrôle nécessaire. Ils sont communiqués par compte-rendu papier ou électronique, les résultats positifs étant en outre transmis par téléphone et faxés au clinicien ou au laboratoire sous-traitant.

La PCR multiplexe en temps réel, technique in house développée et validée par le laboratoire de Microbiologie du CHU de Liège, est utilisée en première ligne à l'arrivée de l'échantillon au LNR : elle cible simultanément E. multilocularis (échinococcose alvéolaire) et E. granulosus sensu stricto, la sous-espèce du complexe E. granulosus sensu lato la plus fréquemment retrouvée dans les cas d'échinococcose kystique. En cas de négativité de cette première PCR, une PCR multiplexe classique, dérivée de la technique publiée par Trachsel et al. (2007), est réalisée ; outre l'identification d'E. multilocularis, elle présente l'avantage de cibler également toutes les sous-espèces du complexe E. granulosus sensu lato par l'amplification d'un gène commun, mais nécessite un séquençage Sanger post-PCR pour discriminer précisément la sous-espèce en cause.

Les prélèvements requis sont une biopsie fraîche ou incluse en paraffine, une pièce chirurgicale fraîche, ou un liquide biologique (bile, liquide pleural, liquide de ponction, prélèvement respiratoire) — ces derniers nécessitant un volume minimum de 1 mL. Les prélèvements se conservent entre 2 et 8°C dans les 24 heures, puis à -20°C au-delà ; ils sont acheminés dans les mêmes conditions de température, les biopsies et pièces chirurgicales fraîches devant en outre être protégées de la déshydratation en étant conservées dans un liquide physiologique stérile, selon les règles d'étiquetage et de conditionnement applicables aux échantillons infectieux.

Les tests sont réalisés tous les jours ouvrables du lundi au vendredi ; les résultats sont disponibles le jour même, ou le lendemain en cas de contrôle nécessaire, avec un délai supplémentaire d'une semaine si un séquençage post-PCR est requis. Ils sont communiqués par compte-rendu papier ou électronique, les résultats positifs étant en outre transmis par téléphone et faxés au clinicien ou au laboratoire sous-traitant.